蛋白质的酶解方法？ 酶解鱼蛋白技术配方？

一、蛋白质的酶解方法？

胶内酶解，蛋白样品在凝胶电泳后进行针对性的酶解

1.蛋白样品进行凝胶电泳后，用刀片切下胶上目标胶点，置于EP管中。

2.用超纯水洗胶块，然后振荡1 min，放置5-10 min 洗去胶上的杂质。然后倒出液体，再加超纯水重复洗一遍，吸水纸吸去液体。

3. ⑴银染脱色：脱色液配制：30 mmol/L K3Fe(CN)6 : 100 mmol/LNa2S2O3=1:1，用前新鲜配制。（参考配制2 mL：K3Fe(CN)6 ：9.9 mg溶于1ml超纯水中，15.85 mg溶于1 mL超纯水中，1：1混匀）注意事项：每次加10个样，加完脱色液后置白纸上观察，颜色脱去后马上加水100 uL冲洗停止反应， 2分钟内吸出，再加100ul水重复洗两次，直到完全洗掉脱色液颜色（胶变得透明），脱色后加入50%乙腈，放置15 min后，吸出液体。

  ⑵考染脱色：加入50％乙腈，37℃水浴脱色，约30 min。可以看到胶上染料基本除去，变透明。如胶上颜色残余较深，可将液体吸出，再重复一遍，直至染料脱去，胶块变透明。

4.100%乙腈脱水至胶块变成白色，放置，若胶块没有变白，可将乙腈吸出，再加入100%乙腈脱水一次。

5.加入还原剂：25 mM的NH4HCO3（含10mM DTT），封口，57℃水浴1 h。参考配制：6.2 mg DTT，溶于4 mL 25 mM的NH4HCO3。（如是2-DE胶，直接跳到第8步）

6.从水浴锅取出样品后，室温冷却，去掉液体，迅速加入同体积的烷基化试剂室温暗处放置30 min.

烷基化试剂：25 mM的NH4HCO3（含55 mM IAA）

参考配制方法（4 mL）：40.69mg IAA溶于4 mL 25 mM的NH4HCO3中

7.去掉烷基化试剂，加入50％乙腈，放置15 min

8.加入50 mM的NH4HCO3震荡后静置吸胀5 min，再吸出。

9.先加50％乙腈脱水一遍，再用100％乙腈脱水至胶块变成白色。

10.每管加入适量的酶液（约2-3 μL），冰上放置30 min，直至胶块吸涨酶液。

酶液配制：2 μg Trypsin加入预冷覆盖液150 μL

覆盖液配制（2 mL）：100％乙腈200 μL，100 mM的NH4HCO 30.5 mL，超纯水1.3 mL

注意事项：酶从冰箱取出后所有操作过程，包括样品加酶后，都要放到冰上。

11.检查酶液吸胀情况，多余的酶液吸走，酶液不够，即胶块中仍有白色，则加入适量酶液。

12.加覆盖液20 uL封口，37℃保温16-18小时。

13.萃取

（1）将样品从37度水浴锅中取出后，超声5 min，10000 g/1 min.

（2）将上清转移到新的200 μL的EP管中。

（3）在剩余胶块中加入萃取液（100%乙腈+2.5%TFA用于SDS胶条，2.5 % TFA，67% CAN用于MALDI，5% Formic Acid 67% ACN用于ESI；90%乙腈+2.5%TFA 用于2D胶），37%保温30 min，超声，合并。      

萃取液参考配制3 mL：75 μLTFA、2010 μL 100％乙腈、915 μL超纯水。

（4）超声15 min，间隔5 min，重复超声15 min。水温不超过40度。

（5）10000g/1 min，合并上清。

14.冷冻离心干燥

       银染凝胶      

考马斯亮蓝染色凝胶

注意事项：

1、每一步加入的液体量视胶块大小定，一般是50 uL/管。

2、每次打开EP管盖子前，确认胶块在管内，并将胶块甩至管底。开盖子动作尽量轻巧，以免胶块弹出。

以上就是胶内蛋白样品的酶解基本过程，希望对大家能有所帮助，如果大家对此方法有任何疑问或建议，欢迎大家在推文下方留言，同时小编会根据大家的反馈，进行更进一步的说明和补充。最后，祝愿科研道路上的大伙们都能数据多多，文章多多，如果您觉得资源对您有所帮助，请多多转发，以帮助更多需要帮助的人!

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二、酶解鱼蛋白技术配方？

，取30-35份预处理后的鱼肉，加入14-16份水，再加入木瓜蛋白酶，加入量为300-600IU/g，在pH为8-9，温度为35-40℃的条件下，酶解0.5-1h，得酶解物。

酶解过程所生成的少量短肽以及氨基酸可以大大增加食品的风味，且该条件下鱼肉蛋白质酶解程度低，酶解物中依然含有大量未酶解的鱼肉蛋白，不影响后续的斩拌过程。

三、酶解鱼蛋白最佳搭档？

胰蛋白酶是酶解鱼蛋白的最佳搭档。鱼蛋白是一种具有多种功能的抗菌肽，具有抗菌活性，并且具有多肽链的结构，在体内需要通过酶解来发挥最佳的作用。而胰蛋白酶是一种分解蛋白质的消化酶，在将蛋白质消化分解为多肽和氨基酸的过程中能够将鱼蛋白的多肽链进行特异性的酶解，是酶解鱼蛋白的最佳搭档。除了胰蛋白酶外，一些其他的酶也能够酶解鱼蛋白，如蛋白酶K、草酸酶等。但相比之下，胰蛋白酶具有特异性更高、效率更高等优势，因此更适合于酶解鱼蛋白。此外，在不同的条件下，胰蛋白酶的最适酶解条件也会有所区别，需要根据实验设计采用不同的酶解条件。

四、蛋白酶解特性？

蛋白酶全名为“蛋白质水解酶”，就 是一种能使蛋白质水解成多肽链或氨基 酸的有机物。蛋白质是氨基酸连成的长 链，如果氨基酸数量比较少就称为肽链，如果氨基酸达到一定数目就称为蛋白质。

  蛋白酶促进蛋白质和水反应，变成 氨基酸。催化蛋白质水解的酶类种类很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶等。蛋白酶对所作用的反应底物有严格 的选择性,一种蛋白酶仅能作用于蛋白质分子中一定的肽键，如胰蛋白酶催化水解碱性氨基酸所形成的肽键。

  由于动 植物资源有限，工业上生产蛋白酶制剂主要利用枯草杆菌等微生物发酵备。蛋白酶主要存在于人和动物消化道中，在植物和微生物中含量丰富。

五、鱼蛋白用什么酶解？

鱼蛋白可以通过特殊酶来进行解析，例如 trypsin 和 endopeptidase。Trypsin 是一种从胰蛋白酶和生物碱基中分离出来的酶，它可以水解在保留室内羧基的情况下穿越脂肪质膜，而endopeptidase 可以水解键在肽链存在能量不足的构象。

六、水解蛋白和酶解蛋白哪个好？

水解蛋白好。

一种蛋白酶仅能作用于蛋白质分子中一定的肽键,如胰蛋白酶催化水解碱性氨基酸所形成的肽键.蛋白酶分布广,主要存在于人和动物消化道中

七、菌解鱼蛋白酶解鱼蛋白区别？

酶解鱼蛋白的优点：

降解程度温和，限度保留了海洋鱼类肉质中的营养成分和活性，不会对其他有效成分造成破坏，生成的鱼蛋白产品为高蛋白营养有机物，除蛋白质、小分子多肽、游离氨基酸外，还有维生素、甲壳素等活性物质，没有废弃物，限度利用资源。

酶解鱼蛋白的缺点：

对蛋白水解酶的种类、温度、pH值要求高，部分氨基酸不稳定容易破坏。

酶解鱼蛋白工艺流程：

1、原料挑选、清洗等处理；

2、发酵、利用酶解、碱解和复合酶系统降解；

3、将降解液固、液分离，同时将分离出的滤渣回收，重新循环降解；

4、水溶性酶解液净化处理、浓缩、干燥和包装。

5、也可添加一些其他提取物，比如黄腐酸、海藻酸等。

酶解鱼蛋白肥厂家：

市场上大部分鱼蛋白企业都是以酶解为主。而这其中包括海大温喜生物、浙江丰宇三立、浙江新田龙、美国普利登、青岛颂田、浙江德邦、浙农海洋、荣成鸿德海洋、国农生物、烟台绿云、广西勤德、台湾味丹、青岛润扬、山东沃土源、宁波吉丰等。

菌解鱼蛋白的优点：

反应条件温和，营养物质流失少，氨基酸不易破坏，多肽、小肽、寡肽含量高，分解产生不饱和脂肪和作物促进因子，纯有机提出，无有害物质残留。

菌解鱼蛋白的缺点：

对生产设备和环境要求较高，对菌种要求严格，生产周期长。

菌解鱼蛋白工艺流程：

1、新鲜整鱼出库解冻

2、淡水清洗

3、粉碎打浆

4、导入反应釜

5、添加碳氨源辅料

6、降温加入复合微生物菌种

7、低温菌解发酵

8、中间检验检测

9、原液过滤固液分离

10、全自动灌装

八、酶解鱼蛋白对桃树的优点？

优点

营养保留全面经过酶解技术分离出18种氨基酸，生成的产品为高活性营养有机物，氨基酸种类保留比较全面，植 物可吸收的左旋氨基酸得到保护，除小分子蛋白质、多肽、游离氨基酸外，还有维生素、甲壳素等活性物质，寡肽 含量较高，有害物质少，在农业中应用无疑是非常合适的。

反应条件温和，营养物质流失少，氨基酸不易破坏，多肽、小肽、寡肽含量高，分解产生不饱和脂肪和作物促进因 子，纯有机提出，无有害物质残留。

九、酶解鱼蛋白可以吃吗？

可以吃。酶解过程所生成的少量短肽以及氨基酸可以大大增加食品的风味，且该条件下鱼肉蛋白质酶解程度低，酶解物中依然含有大量未酶解的鱼肉蛋白，不影响后续的斩拌过程。

十、蛋白酶对植物的作用？

蛋白酶对植物所需养分具有极强的催化功能，不仅能加快植物对土壤中氮、磷、钾及微量营养元素的吸收，还可以改善土壤品质，减少化肥施用量，大幅度减少农民在农业生产上的投入。

释义：

蛋白酶是水解蛋白质肽链的一类酶的总称。按其降解多肽的方式分成内肽酶和端肽酶两类。前者可把大分子量的多肽链从中间切断，形成分子量较小的朊和胨；后者又可分为羧肽酶和氨肽酶，它们分别从多肽的游离羧基末端或游离氨基末端逐一将肽链水解生成氨基酸。